在线PH计应用领域广泛，种类繁多，所以在测量时应按说明书规定的时间周期对仪器进行校准，其校准方法一般采用两点校准法。
首先选择两种标准缓冲液：一种是pH7标准缓冲液，第二种是pH9标准缓冲液或pH4标准缓冲液。先用pH7标准缓冲液对电计进行定位，再根据待测溶液的酸碱性选择第二种标准缓冲液。如果待测溶液呈酸性，则选用pH4标准缓冲液；如果待测溶液呈碱性，则选用pH9标准缓冲液。若是手动调节的在线PH计，应在两种标准缓冲液之间反复操作几次，直至不需再调节其零点和定位(斜率)旋钮，在线PH计即可准确显示两种标准缓冲液pH值。则校准过程结束。
标准缓冲溶液温度尽量与被测溶液温度接近。
定位标准缓冲溶液应尽量接近被测溶液的pH值。或两点标定时，应尽量使被测溶液的pH值在两个标准缓冲溶液的区间内。
校准后，应将浸入标准缓冲溶液的电极用水特别冲洗，因为缓冲溶液的缓冲作用，带入被测溶液后，造成测量误差。
此后，在测量过程中零点和定位旋钮就不应再动。若是智能式在线PH计，则不需反复调节，因为其内部已贮存几种标准缓冲液的pH值可供选择、而且可以自动识别并自动校准。但要注意标准缓冲液选择及其配制的准确性。智能式0.01级在线PH计一般内存有三至五种标准缓冲液pH值，
其次，在校准前应特别注意待测溶液的温度。以便正确选择标准缓冲液,并调节电计面板上的温度补偿旋钮,使其与待测溶液的温度一致。不同的温度下，标准缓冲溶液的pH值是不一样的。
校准工作结束后，对使用频繁的在线PH计一般在48小时内仪器不需再次定标。如遇到下列情况之一，仪器则需要重新标定：
(1)定位或斜率调节器被误动；
(2)测量过酸(pH<2)或过碱(pH>12)的溶液后；
(3)换过电极后；
(4)溶液温度与定标温度有较大的差异时.
(5)电极在空气中暴露过久，如半小时以上时.
(6)当所测溶液的pH值不在两点定标时所选溶液的中间，且距7pH又较远时。
记录被测溶液的pH值时应同时记录被测溶液的温度值，因为离开温度值，pH值几乎毫无意义。尽管大多数在线PH计都具有温度补偿功能，但仅仅是补偿电极的响应而已，也就是说只是半补偿，而没有同时对被测溶液进行温度补偿，即，全补偿。
